操作條件要求：
由于ACQUITY UPLC BEH HILIC色譜柱不含有任何鍵合相，因此其pH使用范圍為1-8，可以在90℃穩(wěn)定范圍內(nèi)使用
同其它任何色譜柱一樣，在pH、壓力以及高溫條件下使用將縮短色譜柱壽命
色譜柱平衡：
用50倍柱體積的50/50乙腈/水平衡，如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽則要求流動(dòng)相中緩沖鹽的zui終濃度是10 mmol/L（以水相部分的濃度計(jì)算）；
在開始進(jìn)樣前，用20倍柱體積的起始流動(dòng)相平衡后再進(jìn)樣
如果使用梯度條件，在進(jìn)樣前用8-10倍柱體積的流動(dòng)相平衡
沒有充分平衡的色譜柱將可能會(huì)出現(xiàn)保留時(shí)間的波動(dòng)
總是保持流動(dòng)相中緩沖液的濃度為10mM（包括梯度條件下的應(yīng)用）將得到更好的峰形
流動(dòng)相要求：
總是經(jīng)常保持至少5％的極性溶劑在流動(dòng)相體系中或梯度流動(dòng)相中（如5％水，5％甲醇或2％水＋3％甲醇等），這將保證HILIC色譜填料始終處于水化潤濕狀態(tài)
在流動(dòng)相體系中至少需要保證含有40％的有機(jī)溶劑（如乙腈）
盡量避免使用磷酸鹽體系的流動(dòng)相（磷酸鹽緩沖液可能會(huì)在HILIC流動(dòng)相體系中析出）
同甲酸或乙酸流動(dòng)相相比，甲酸銨或乙酸銨緩沖溶液作流動(dòng)相可以得到重現(xiàn)性更好的結(jié)果。如果方法中一定要用甲酸或乙酸，應(yīng)該用0.2%（v/v）而不是0.1%（v/v）
進(jìn)樣溶液的要求：
如果可能，進(jìn)樣溶劑應(yīng)該是100％有機(jī)溶劑，要盡可能去除樣品溶液中的水或?qū)⑵浜縵ui低化。選擇洗脫強(qiáng)度弱的HILIC溶劑如乙腈、異丙醇、甲醇等
通用的進(jìn)樣溶液是75/25乙腈/甲醇，使用此條件可以獲得較好的樣品溶解度和色譜峰形
避免使用水或DMSO作進(jìn)樣溶劑（色譜峰形很差）
如果樣品內(nèi)含有水或DMSO，需要使用反相SPE技術(shù)將溶劑體系轉(zhuǎn)換為乙腈。如果確實(shí)不能進(jìn)行此操作，需要用有機(jī)溶劑稀釋水或DMSO。
其它需要注意的問題：
ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色譜柱僅僅是用來分析和保留強(qiáng)極性堿的，酸性、中性或非極性化合物沒有保留
對(duì)于分子量低于200道爾頓的強(qiáng)極性堿，ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色譜柱的*流速范圍是0.4~0.8ml/min
同Atlantis HILIC 硅膠基質(zhì)的色譜柱相比，ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色譜柱的保留要弱（梯度條件下保留約低20％，等度條件下保留約低35～65％），這是由于BEH顆粒的表面硅羥基濃度較低的原因
在HILIC的使用中，請(qǐng)注意水是洗脫能力zui強(qiáng)的溶劑，因此樣品溶液中必須盡可能避免含水
摸索條件建議使用一個(gè)梯度條件（從95％乙腈至50％乙腈的梯度），如果沒有保留，則用95：3：2的乙腈：甲醇：水相緩沖液進(jìn)行等度分析
將流動(dòng)相中的水換成甲醇、丙酮或異丙醇也能提高保留
請(qǐng)確保進(jìn)樣針清洗的弱清洗溶劑是起始流動(dòng)相（如高比例有機(jī)溶劑），否則峰形將變差